HLA分型SSO法
簡介
LABType® SSO使用序列特異性的寡核苷酸探針連接到熒光染色的微珠上來檢測樣品DNA編碼的等位基因。LABType® SSO技術(shù)只需PCR擴(kuò)增靶DNA，雜交和檢測在同一個反應(yīng)混合物中完成，所以該方法既適于小規(guī)模又適于大規(guī)模的的HLA分型實(shí)驗(yàn)。相對于淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1=陰性--- 8=陽性），LABType®的試驗(yàn)結(jié)果只有陰性和陽性兩種結(jié)果，這就排除了復(fù)雜的結(jié)果分析。此外，HLA系統(tǒng)的交叉反應(yīng)組導(dǎo)致血清學(xué)分型錯綜復(fù)雜,而PCR-SSO（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—序列特異性寡核苷酸）能區(qū)分單個核苷酸的改變。
SSO原理
LABType®在反向SSO DNA分型法中應(yīng)用Luminex技術(shù)。首先，靶DNA使用組特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物是被生物素化的，可以使用R-藻紅蛋白結(jié)合鏈霉親和素（SAPE）進(jìn)行檢測。
PCR產(chǎn)物先被變性，然后再與包被在微珠上的DNA-探針互補(bǔ)雜交。流式分析儀LABScan ™100(Luminex100/200)或LABScan ™3D(Luminex®FLEXMAP 3D)檢測每個微珠的熒光強(qiáng)度。根據(jù)反應(yīng)類型與已發(fā)表HLA基因序列相關(guān)反映類型的比較來判定HLA分型結(jié)果。
產(chǎn)品優(yōu)勢
1、 擁有CE、FDA、CFDA認(rèn)證；
2、 完善的客服和專業(yè)的技術(shù)支持；
3、 國內(nèi)各大臨床醫(yī)院及血液中心穩(wěn)定使用；
4、 精確，快速，高通量，經(jīng)濟(jì)；
5、 自動讀取數(shù)據(jù)和分析結(jié)果，降低人為誤差；
6、 無需電泳，避免接觸有毒物質(zhì)；
7、 比SSP方法DNA用量少，濃度要求低。
Luminex方法原理
流式熒光技術(shù)，又稱懸浮陣列、液態(tài)芯片。經(jīng)過近20多年的發(fā)展，已經(jīng)成為全球科研、醫(yī)藥和臨床機(jī)構(gòu)廣泛采用的的一種高通量、高速度的生物學(xué)檢測方法。流式熒光有機(jī)整合了抗原抗體免疫反應(yīng)、核酸多重擴(kuò)增、基于微球的多指標(biāo)聯(lián)檢、毛細(xì)管液流分析、多色激發(fā)熒光和高速數(shù)字信號處理技術(shù)，具有很高的門檻。
流式熒光聯(lián)檢特色的核心是把一定大小（4.5～7μm）、不同熒光染料染色的烯聚物小球（統(tǒng)稱編碼微球），共價交聯(lián)上針對特定檢測物的探針、抗原或抗體。應(yīng)用時，直接混合不同檢測物的編碼微球，再加入微量待檢樣本，在懸液中靶分子與微球表面交聯(lián)的分子進(jìn)行特異性地結(jié)合，在一個反應(yīng)孔內(nèi)即可以同時完成數(shù)十上幾百種不同的生物學(xué)反應(yīng)，而不相互干擾。最后用流式細(xì)胞檢測類儀器進(jìn)行分析，儀器通過多束激光及其被照物（生物化學(xué)標(biāo)記物）的發(fā)射吸收譜、信號強(qiáng)度，來識別編碼微球、以及定量樣品中各單項(xiàng)指標(biāo)數(shù)值（通過對各檢測微球上報告分子的熒光強(qiáng)度讀數(shù)）。
流式熒光技術(shù)相關(guān)的研究論文頻頻刊登在《自然》、《臨床化學(xué)》、《臨床與診斷免疫學(xué)》、《臨床微生物》、《基因組研究》、《蛋白質(zhì)組研究》、《癌癥》等國際權(quán)威學(xué)術(shù)雜志上。隨著更多開發(fā)及應(yīng)用者的重視、硬件技術(shù)的發(fā)展和聯(lián)檢分析物的快速增加，其主流地位得到進(jìn)一步鞏固。
實(shí)驗(yàn)流程
簡介
LABType® SSO使用序列特異性的寡核苷酸探針連接到熒光染色的微珠上來檢測樣品DNA編碼的等位基因。LABType® SSO技術(shù)只需PCR擴(kuò)增靶DNA，雜交和檢測在同一個反應(yīng)混合物中完成，所以該方法既適于小規(guī)模又適于大規(guī)模的的HLA分型實(shí)驗(yàn)。相對于淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1=陰性--- 8=陽性），LABType®的試驗(yàn)結(jié)果只有陰性和陽性兩種結(jié)果，這就排除了復(fù)雜的結(jié)果分析。此外，HLA系統(tǒng)的交叉反應(yīng)組導(dǎo)致血清學(xué)分型錯綜復(fù)雜,而PCR-SSO（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—序列特異性寡核苷酸）能區(qū)分單個核苷酸的改變。
SSO原理
LABType®在反向SSO DNA分型法中應(yīng)用Luminex技術(shù)。首先，靶DNA使用組特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物是被生物素化的，可以使用R-藻紅蛋白結(jié)合鏈霉親和素（SAPE）進(jìn)行檢測。
PCR產(chǎn)物先被變性，然后再與包被在微珠上的DNA-探針互補(bǔ)雜交。流式分析儀LABScan ™100(Luminex100/200)或LABScan ™3D(Luminex®FLEXMAP 3D)檢測每個微珠的熒光強(qiáng)度。根據(jù)反應(yīng)類型與已發(fā)表HLA基因序列相關(guān)反映類型的比較來判定HLA分型結(jié)果。
產(chǎn)品優(yōu)勢
1、 擁有CE、FDA、CFDA認(rèn)證；
2、 完善的客服和專業(yè)的技術(shù)支持；
3、 國內(nèi)各大臨床醫(yī)院及血液中心穩(wěn)定使用；
4、 精確，快速，高通量，經(jīng)濟(jì)；
5、 自動讀取數(shù)據(jù)和分析結(jié)果，降低人為誤差；
6、 無需電泳，避免接觸有毒物質(zhì)；
7、 比SSP方法DNA用量少，濃度要求低。
Luminex方法原理
流式熒光技術(shù)，又稱懸浮陣列、液態(tài)芯片。經(jīng)過近20多年的發(fā)展，已經(jīng)成為全球科研、醫(yī)藥和臨床機(jī)構(gòu)廣泛采用的的一種高通量、高速度的生物學(xué)檢測方法。流式熒光有機(jī)整合了抗原抗體免疫反應(yīng)、核酸多重擴(kuò)增、基于微球的多指標(biāo)聯(lián)檢、毛細(xì)管液流分析、多色激發(fā)熒光和高速數(shù)字信號處理技術(shù)，具有很高的門檻。
流式熒光聯(lián)檢特色的核心是把一定大小（4.5～7μm）、不同熒光染料染色的烯聚物小球（統(tǒng)稱編碼微球），共價交聯(lián)上針對特定檢測物的探針、抗原或抗體。應(yīng)用時，直接混合不同檢測物的編碼微球，再加入微量待檢樣本，在懸液中靶分子與微球表面交聯(lián)的分子進(jìn)行特異性地結(jié)合，在一個反應(yīng)孔內(nèi)即可以同時完成數(shù)十上幾百種不同的生物學(xué)反應(yīng)，而不相互干擾。最后用流式細(xì)胞檢測類儀器進(jìn)行分析，儀器通過多束激光及其被照物（生物化學(xué)標(biāo)記物）的發(fā)射吸收譜、信號強(qiáng)度，來識別編碼微球、以及定量樣品中各單項(xiàng)指標(biāo)數(shù)值（通過對各檢測微球上報告分子的熒光強(qiáng)度讀數(shù)）。
流式熒光技術(shù)相關(guān)的研究論文頻頻刊登在《自然》、《臨床化學(xué)》、《臨床與診斷免疫學(xué)》、《臨床微生物》、《基因組研究》、《蛋白質(zhì)組研究》、《癌癥》等國際權(quán)威學(xué)術(shù)雜志上。隨著更多開發(fā)及應(yīng)用者的重視、硬件技術(shù)的發(fā)展和聯(lián)檢分析物的快速增加，其主流地位得到進(jìn)一步鞏固。
實(shí)驗(yàn)流程