支原體檢測：熒光PCR+毛細(xì)管電泳（藥典推薦）。2021本平臺的支原體檢測法已更新為熒光PCR+毛細(xì)管電泳。替代原來的PCR法+恒溫法，靈敏度更高、更精確。
細(xì)胞培養(yǎng)液是否有支原體污染，該方法可覆蓋ATCC/DSMZ報(bào)道的細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染中常見的10大類55個亞種的污染。

支原體檢測
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染的情況常有發(fā)生。當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)會發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長率通常并未發(fā)生顯著的影響，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。美德華生使用支原體特異性引物擴(kuò)增細(xì)胞培養(yǎng)樣本，與含有支原體的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和不含有支原體的陰性標(biāo)準(zhǔn)品比對，便可知道細(xì)胞樣本中是否含有支原體。除此之外，還可以根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的片段大小判斷污染細(xì)胞的支原體的種類。

PCR法檢測的支原體

13種支原體大約占污染細(xì)胞的支原體種類的99%左右，因此PCR能達(dá)到99%；
+恒溫法則能達(dá)到99.9%。

華科鑒聯(lián)基因可以提供PCR法+恒溫法支原體檢測。暫不提供培養(yǎng)法支原體檢測。

《PCR法支原體檢測試劑盒》可用于檢測一切可能含支原體的樣品，比如：

（1）體外細(xì)胞培養(yǎng)的上清；
（2）血清；
（3）各種體液，如唾液、尿液、鼻腔分泌物等；
（4）別的液體樣品。本產(chǎn)品僅供研究使用。

產(chǎn)品簡介

    哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細(xì)胞的所有參數(shù)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確、甚至完全錯誤（支原體污染對細(xì)胞的詳細(xì)危害，請參考本公司的網(wǎng)站：www.yisemed.com）。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測。相信會有越來越多的高水平期刊將做出同樣的支原體檢測要求。

    培養(yǎng)法是相對可靠的支原體檢測技術(shù)，但是該方法非常耗時的，需要數(shù)周，不適合作為細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體污染的快速檢測。此外，通過固體培養(yǎng)法無法檢測污染細(xì)胞的一種最常見的支原體，即豬鼻支原體（M.Hyorhinis）。這是因?yàn)樨i鼻支原體無法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見的菌落。而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。

    有的實(shí)驗(yàn)室使用熒光染色法檢測支原體，但是該方法靈敏度太低，當(dāng)檢測成陽性時，細(xì)胞經(jīng)常已經(jīng)嚴(yán)重污染。

    本公司已經(jīng)開發(fā)出了專用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》，與PCR法支原體檢測相比，其具有許多優(yōu)點(diǎn)：耗時短、靈敏度高、操作簡單、不會被細(xì)胞代謝產(chǎn)物抑制、結(jié)果無需電泳肉眼可直接判斷等。

    盡管如此，《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》可能也有個小缺點(diǎn)：因?yàn)椤兑徊椒ê銣刂гw檢測試劑盒》需要至少同時使用4條引物才能完成擴(kuò)增，其引物設(shè)計(jì)相對困難。雖然經(jīng)我們測試，該試劑盒至少可認(rèn)識其說明書中列舉的13種支原體，而這13種支原體大約占污染細(xì)胞的支原體種類的99%左右。但是，不排除《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》無法識別個別在體外細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)概率極低的支原體。為此，我們特意開發(fā)了具有廣譜識別能力的《PCR法支原體檢測試劑盒》。

    經(jīng)測試，本公司開發(fā)的《PCR法支原體檢測試劑盒》至少可以識別在體外細(xì)胞培養(yǎng)中曾經(jīng)報(bào)道出現(xiàn)的20種支原體，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，這些支原體基本上占污染細(xì)胞的支原體種類的100%。具體如下：（1）M. hyorhinis、（2）M. fermentans、（3）M. arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M. bovis、(11)  M. bovoculi、（12）Acholeplasma axanthum、（13）M. buccale、 (14) M. pneumoniae、（15）M. arthritidis、（16）M. pulmonis、（17）M. gallisepticum、（18）M. gallinarum、（19）M. canis、（20）Ureaplasma urealyticum（注：M.為Mycoplasma的縮寫）。
如果客戶發(fā)現(xiàn)除上述20種支原體外，還有其他的支原體也會污染體外培養(yǎng)的細(xì)胞，或者客戶純粹就是想檢測其他的支原體，請告訴我們支原體的名稱，我們將進(jìn)行序列比對，然后告訴你本試劑是否可以識別。此外，根據(jù)支原體DNA的序列，本試劑盒可以識別100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體，具有廣譜的識別能力。

 

    此外，作為支原體檢測領(lǐng)域的共識，單獨(dú)使用任何一種支原體檢測方法，都無法做到100%正確，既不會漏檢（假陰性），也不會多檢（假陽性）。嚴(yán)格的支原體檢測，至少需要使用兩種（最好使用三種）不同原理的支原體檢測方法同時進(jìn)行檢測，才能使檢測結(jié)果接近100%正確。

 

    如果您想得到100%正確的支原體檢測結(jié)果（比如，開展細(xì)胞治療的客戶，進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)的客戶，生產(chǎn)血清、胰酶、培養(yǎng)液的客戶，出售各種原代培養(yǎng)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系的客戶等），任選本公司生產(chǎn)的《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》、《PCR法支原體檢測試劑盒》和《發(fā)光法支原體檢測試劑盒》中的兩種進(jìn)行檢測，將會得到比較滿意的結(jié)果，檢測的正確率應(yīng)該在99.9%以上。如果同時使用這三種試劑盒進(jìn)行檢測，檢測的正確率應(yīng)該在99.99%以上。