細(xì)胞STR分型檢測流程
首先了解下STR檢測流程，先提取細(xì)胞DNA, 然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測序，最后進(jìn)行結(jié)果分析。詳細(xì)檢測流程請(qǐng)看下圖：
▲圖1 STR檢測流程
Dr.Cell 采用的細(xì)胞STR鑒定方法完全符合美國國家標(biāo)準(zhǔn)局（NIST）頒布的細(xì)胞鑒定標(biāo)準(zhǔn)-ANSI/ATCC ASN-0002-2011, 并且在中國CMA認(rèn)證與司法鑒定許可的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。
STR位點(diǎn)基因分型結(jié)果
完整的細(xì)胞STR檢測報(bào)告請(qǐng)查閱（STR Report-Sample），報(bào)告上會(huì)列出受檢細(xì)胞系STR基因分型結(jié)果附表（圖2），表格中將列出所有實(shí)際檢測位點(diǎn)信息。第2列“Sample”為樣本檢測得到的STR位點(diǎn)信息, 該結(jié)果是根據(jù)實(shí)際PCR擴(kuò)增后檢測到的片段長度得到的數(shù)據(jù)信息。第3列為ATCC、DSMZ等數(shù)據(jù)庫中標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞STR位點(diǎn)信息。數(shù)據(jù)庫中常規(guī)提供9個(gè)位點(diǎn)信息，即 Amelogenin, CSF1PO, D13S317, D16S539, D5S818, D7S820, THO1, TPOX, vWA。
▲圖2 STR基因分型結(jié)果
STR位點(diǎn)基因分型結(jié)果峰圖
在報(bào)告中會(huì)給出受檢細(xì)胞系的STR檢測結(jié)果峰圖（圖3），該峰圖是實(shí)際PCR擴(kuò)增后檢測到的片段長度和分型信息。位點(diǎn)信息與表1（圖2）相同。
▲圖3 STR基因分型結(jié)果峰圖
STR: 短串聯(lián)重復(fù)序列（short tandem repeats，STR）也稱微衛(wèi)星DNA（microsatellite DNA）, 通常是基因組中由1~6個(gè)堿基單元組成的一段DNA重復(fù)序列，由于核心單位重復(fù)數(shù)目在個(gè)體間呈高度變異性并且數(shù)量豐富，構(gòu)成了STR基因座的遺傳多態(tài)性。
▲圖4 STR 短串聯(lián)重復(fù)序列
純合子：Homozygote，指同源染色體在同一基因位點(diǎn)上的兩個(gè)等位基因相同。即顯示單個(gè)峰。
雜合子：Heterozygote，指同源染色體在同一基因位點(diǎn)上的兩個(gè)等位基因不相同。即顯示2個(gè)峰。
▲圖5 STR位點(diǎn)峰圖
人源正常組織細(xì)胞其STR圖譜，一個(gè)基因位點(diǎn)僅出現(xiàn)一個(gè)或2個(gè)峰（更多信息請(qǐng)查閱短串聯(lián)重復(fù)序列 (STR, short tandem repeats) ）。如發(fā)生細(xì)胞交叉污染現(xiàn)象，基因位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)多等位基因，即一個(gè)基因位點(diǎn)出現(xiàn)3或4個(gè)峰（圖6）。當(dāng)然，也不能排除可能為三倍體等多倍體突變現(xiàn)象。
▲圖6 多等位基因峰圖
STR位點(diǎn)基因分型結(jié)果比對(duì)
根據(jù)鑒定得到的細(xì)胞STR位點(diǎn)信息在ATCC、DSMZ等數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)入ATCC STR數(shù)據(jù)庫頁面（https://www.atcc.org/en/STR_Database.aspx ）輸入檢測細(xì)胞的9個(gè)STR位點(diǎn)信息，與ATCC數(shù)據(jù)庫進(jìn)行對(duì)比。
▲圖7 ATCC 數(shù)據(jù)庫比對(duì)
輸入信息后給出比對(duì)結(jié)果（圖8）
▲圖8 ATCC數(shù)據(jù)庫比對(duì)結(jié)果
同樣在DMSZ數(shù)據(jù)庫進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)，得到匹配結(jié)果。
▲圖9 DSMZ數(shù)據(jù)庫比對(duì)結(jié)果
比對(duì)結(jié)果中"%Match"（ATCC, 圖8）及 "EV" （DSMZ, 圖9）列是受檢細(xì)胞的9個(gè)STR位點(diǎn)基因分型數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫中細(xì)胞的匹配度。
人源細(xì)胞STR鑒定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：
1.根據(jù)國際細(xì)胞鑒定委員會(huì)(ICLAC)制定的細(xì)胞STR鑒定標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞系的匹配度≥80% 時(shí)，認(rèn)為它們具有相關(guān)性，即衍生于共同的祖先細(xì)胞；匹配度在55% 至 80% 之間，需要進(jìn)一步驗(yàn)證相關(guān)性；小于55%，表明兩者不具有相關(guān)性。
2.圖譜有效峰為真實(shí)的PCR條帶;小峰和非特異性條帶在計(jì)算中忽略不計(jì)。
3.本匹配度計(jì)算默認(rèn)依照ATCC的計(jì)算規(guī)則，少數(shù)情況時(shí)依照DSMZ的計(jì)算規(guī)則，若有個(gè)性化需求委托方可提前提出。
4.委托方細(xì)胞樣本若為干細(xì)胞，免疫細(xì)胞，原代細(xì)胞等細(xì)胞，且未提交至公開數(shù)據(jù)庫，STR數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫比對(duì)無意義。
5.STR數(shù)據(jù)比對(duì)默認(rèn)ATCC，DSMZ，JCRB等細(xì)胞庫，也可比對(duì)ECACC,COG,CBA,KCLB等數(shù)據(jù)庫或文獻(xiàn)，需提前注明被檢樣本的比對(duì)來源。
6.基因座分型只有一個(gè)數(shù)字，表示該基因座為純合子；基因座有兩個(gè)不同數(shù)字，表示該基因座為雜合子。